本发明涉及一种缺失型人角质细胞生长因子-Ⅰ二硫键变构体及其制备和应用，其特征为该二硫键变构体含有对应于天然人角质细胞生长因子-Ⅰ第40位和第106位半胱氨酸间的非天然二硫键结构。本发明利用基因工程技术制备获得重组人角质细胞生长因子-Ⅰ缺失型突变体后，通过特有的二硫键配对复性方法促使形成缺失型突变体第17位和第83位半胱氨酸间的非天然二硫键。该二硫键变构体具有抑制纤维增生、抑制新生血管生长的生物学作用，临床上有望开发成预防和治疗纤维化增生性疾病和血管增生性疾病的药物。